banner

Блог

May 15, 2023

Киноварь и киноварь участвуют в биосинтезе оммохромного пигмента в глазах, но не в крыльях бабочек Bicyclus Anynana.

Научные отчеты, том 13, Номер статьи: 9368 (2023) Цитировать эту статью

Подробности о метриках

Если один и тот же пигмент обнаруживается в разных тканях организма, естественно предположить, что в каждой ткани одинаково задействованы одни и те же метаболические пути. Здесь мы показываем, что это не относится к оммохромам, красным и оранжевым пигментам, обнаруженным в глазах и крыльях бабочек. Мы проверили экспрессию и функцию киновари и киновари, двух известных генов мух в оммохромном пути, в развитии пигментов в глазах и крыльях бабочек Bicyclus Anynana, причем оба признака имеют красноватые/оранжевые пигменты. Используя флуоресцентную гибридизацию in-situ (HCR3.0), мы локализовали экспрессию киновари и киновари в цитоплазме пигментных клеток омматидий, но не обнаружили четкой экспрессии ни одного гена на крыльях личинки и куколки. Затем мы нарушили функцию обоих генов с помощью CRISPR-Cas9, что привело к потере пигмента в глазах, но не в крыльях. Методами тонкослойной хроматографии и УФ-видимой спектроскопии выявлено наличие оммохрома и предшественников оммохрома в оранжевых чешуйках крыльев и в гемолимфе куколок. Мы пришли к выводу, что крылья либо синтезируют оммохромы локально с помощью еще не идентифицированных ферментов, либо включают эти пигменты, синтезированные где-то еще из гемолимфы. Таким образом, разные метаболические пути или механизмы транспорта приводят к присутствию оммохромов в крыльях и глазах бабочек B. Anynana.

Оммохромы — это красные/оранжевые пигменты, встречающиеся у различных видов и выполняющие разнообразные функции. Они присутствуют в пигментсодержащих клетках ракообразных, пауков и насекомых и играют важную роль в формировании цветового рисунка, зрительной фильтрации, защите от ультрафиолета и детоксикации триптофана1. Оммохромы, обнаруженные в пигментных клетках омматидий насекомых, оптической единице глаз насекомых, играют важную роль в защите фоторецепторных клеток и в общей пигментации глаз1,2,3. Оммохромы, обнаруженные в пятнах красного и оранжевого цвета на крыльях бабочек, таких как бабочки Elymnias Hypermnestratinctoria4, Junonia coenia5,6 и Agraulis vanilla7, вероятно, служат сигнальной ролью привлечения партнера или избегания хищников.

Оммохромы производятся посредством пути биосинтеза оммохромов, ферменты которого в основном изучались на глазах модельных систем насекомых, таких как Drosophila melanogaster8, Tribolium castaneum9, Aedes aegypti10 и чешуекрылые Bombyx mori11 и Plutella xylostella12. По этому пути аминокислота триптофан превращается в пигменты ксантомматин и дигидроксантомматин, цвет которых может быть от желтого до красного в зависимости от восстанавливающей среды клетки13. У дрозофилы четыре ключевых гена, кодирующих различные ферменты этого пути, включают киноварь, кинуренинформамидазу (кфазу), киноварь и кардинал12. После того, как триптофан включается в пигментные клетки с помощью предполагаемого переносчика монокарбоксилата кармоизина14, киноварь кодирует триптофаноксигеназу, которая превращает триптофан в формилкинуренин15. кинуренинформамидаза (kfase) кодирует одноименный фермент, который превращает формилкинуренин в кинуренин16. киноварь кодирует кинуренин-3-гидроксилазу, которая превращает кинуренин в 3-гидроксикинуренин12. Наконец, кардинал кодирует феноксазинонсинтетазу, которая катализирует превращение 3-гидроксикинуренина в ксантомматин (оранжевый), который в дальнейшем может превращаться в дигидроксантомматин (красный) в восстановительных химических условиях13.

Некоторые из тех же генов, кодирующих оммохромные ферменты, предшественники метаболитов оммохрома и регулятор транскрипционного фактора оммохрома глаза также были идентифицированы в крыльях нескольких видов нимфалидных бабочек. У Vanessa cardui триптофан включен в красные и бежевые домены крыла17, а экспрессия как киновари, так и киновари присутствует в пигментированных красными участками развивающихся крыльев Heliconius Erato18. Более поздние исследования определили optix как один из ключевых факторов транскрипции, регулирующих наличие оммохромных пигментов у бабочек19, поскольку его нокаут приводил к потере красной и оранжевой цветовой пигментации у многих видов бабочек, а также к снижению регуляции оммохрома. гены, связанные с путями, в крыльях20. Однако непосредственная роль киновари и киновари в производстве оммохромных пигментов в крыльях бабочек не исследована.

 60% pupal development) pupal wings with thicker cuticles were digested in 2.5 μL Proteinase K in 200 μL 1X PBST for 2 min at 55 °C in order to enhance tissue permeability for probe entry. Subsequently, the wings were placed on ice and the digestion mix was replaced with 2 mg/mL glycine in 1X PBST was added to stop the reaction. Tissues were then washed thrice with 1X PBST and twice with 5X SSCT. The tissues were incubated in 30% probe hybridization buffer at 37 °C for 30 min, before a longer incubation in 30% probe hybridization buffer with 0.02 μM primary probes (specific to vermilion, cinnabar, and kfase) at 37 °C for 16 h. Tissues were washed four times in 30% probe wash buffer in 15-min intervals at 37 °C and washed twice with 5X SSCT at room temperature. The tissues were incubated in amplification buffer for 30 min at room temperature and subsequently in amplification buffer with secondary fluorescent probes in the dark at room temperature for 12 h. The tissues were then washed in 5X SSCT for four times in 20-min intervals, incubated with DAPI diluted in 5X SSCT for 5 min and washed twice with 5X SSCT. The tissues were mounted on a glass slide in mounting buffer and imaged with an Olympus FV3000 confocal microscope./p>

3.0.CO;2-S" data-track-action="article reference" href="https://doi.org/10.1002%2F%28SICI%291520-6327%281997%2936%3A3%3C215%3A%3AAID-ARCH5%3E3.0.CO%3B2-S" aria-label="Article reference 5" data-doi="10.1002/(SICI)1520-6327(1997)36:33.0.CO;2-S"Article CAS Google Scholar /p>

ДЕЛИТЬСЯ